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兔血管紧张素 II(Angiotensin-2)ELISA 试剂盒

  ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 )

 

原理

本实验采用双抗体夹心  ABC-ELISA 法。用抗兔   Angiotensin-2   单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的   Angiotensin-2与单抗结合,加入生物素化的抗兔 Angiotensin-2 ,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在 450nm 处测 OD 值,Angiotensin-2 浓度与 OD 值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中Angiotensin-2 浓度。

试剂盒组成 ( 2-8 ℃保存)

酶标 板 (Coated Wells )

96 孔

酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate )

12ml

10 ×标本稀释液(Sample Buffer )

12ml

20×浓缩洗涤液( Wash Buffer )

50ml

标准品 (Standards ) : 250ng/瓶

2 瓶

底物工作液(TMB Solution )

12ml

一抗体工作液( Biotinylated Antibody )

12ml

终止液 (Stop Solution )

12ml

准备试剂与收集血样

1.  收集标本:血清、血浆(EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 ℃ 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反复冻融。

2.  标准品液配制:使用前加入1ml 蒸馏水 混匀,配成 250 ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管,第一管加标本稀释液 9 00ul ,第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在第一管中加入 250 ng/ml 的标准品溶液 1 00ul 混匀后用加样器吸出 500ul ,移至第二 管 。如此反复作对倍稀释,从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。

4.  洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)

检测程序

1.  加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。

3.  每孔中加入第一抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板:同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

6.  洗板:同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗处反应15 分钟。

8.  每孔加入100ul 终止液混匀。

9.  30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。

结果计算与判断

1.  所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。

2.  以标准品25 、 12.5 、 6.25 、 3.12 、 1.56 、 0.78 、 0.39 、 0  ng /ml 为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。

3.  根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 Angiotensin-2 含量。

试剂盒性能

   1.    灵敏度 : 最小的Angiotensin-2  检测浓度小于 0.2n g/ml。

2.  特异性: 可同时检测重组或天然的兔 Angiotensin-2 。 不与 兔其它细胞因子有交叉反应。

3.  重复性:板内、板见变异系数均小于9.6%。

注意事项

   1.    以上标准孔及待 测 样品均建议做复孔,每次测定应同时 做 标准曲线。

 2.   洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。

   3.    板条开封后剩余板条要再封好,保持 板条干燥 。

   4.   本试剂盒宜置 4 o C冰箱保存。

 5.    本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!

 


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